1.試劑和溶液

1）轉(zhuǎn)印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇

2）氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B

3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液：TBST配制的5%牛奶

5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯色系統(tǒng)：ECL顯色

2.實驗步驟

1電泳：將裂解液進行SDS-PAGE電泳，80v，30分鐘，120v，90分鐘；

2轉(zhuǎn)膜：PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右，濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預濕，半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，10v，150分鐘；

3染色：氨基黑染色5分鐘，甲醇褪去背景色，觀察條帶；

4膜活化：將PVDF膜置于甲醇活化1min，用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次；

5封閉：將膜條置于5%牛奶或2% BSA中，室溫混搖2h；

6一抗孵育：將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度（參照抗體說明書，根據(jù)客戶預實驗結(jié)果，稀釋度上下浮動一個數(shù)量級都為正常），將膜放入對應的已稀釋待檢樣品中，置4℃混搖孵育隔夜；

7洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；

8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標記的二抗（參照二抗說明書進行稀釋）中，室溫混搖2h；

9洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；

10ECL顯色：將膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜取出貼在有熒光角標的膠片上，迅速用保鮮膜包好；

11曝光：把底片放在暗盒中，根據(jù)熒光強度分別對X光膠片作不同時間段的曝光，曝光結(jié)束后，將底片取出，1min顯影，30s清洗，1min定影，30s清洗，晾干；

12結(jié)果分析：用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描，做后續(xù)結(jié)果分析。

購買放心細胞株細胞系，耐藥濃度倍數(shù)高穩(wěn)定耐藥株，選擇慧穎生物

慧穎生物提供腫瘤耐藥細胞株的建立與服務。慧穎生物可以根據(jù)客戶要求構(gòu)建相應的細胞系。腫瘤耐藥株的建立和應用，能夠給予臨床zui直接的指導。

服務內(nèi)容 價格 服務周期

藥物濃度梯度遞增法建立耐藥細胞株 詢價6個月

大劑量間歇誘導法建立耐藥細胞株 詢價6個月

主要提供一下耐藥細胞株的建立：

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株

人乳腺癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫杉醇耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人結(jié)腸癌長春新堿耐藥株

人口腔上皮癌長春新堿耐藥株

人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株

人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株

人卵巢癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株

人結(jié)腸癌長春新堿耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人乳腺癌抗雌激素耐藥株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依賴性乳腺癌細胞

服務周期

1. 有現(xiàn)成的細胞系：6個月，具體時間根據(jù)客戶的要求以及樣本數(shù)而定；

2. 沒有已建成的細胞系，需要構(gòu)建，公司構(gòu)建時間約為15個月左右。

公司熱賣耐藥株：K562/Adr細胞，BIU-87/Adr細胞，A549/DDP細胞，NCI-H446/VP細胞，A549/Taxol細胞，A549/DDP細胞，H1975/培美曲塞細胞，BEL-7402/FU細胞，HCT-8/VCR細胞，HCT-8/FU細胞，HCT-8/Taxol細胞，A2780/Taxol細胞，A2780/DDP細胞，MCF-7/Adr細胞，Eca-109/VCR細胞，SGC-7901/DDP細胞，PATU-8988/FU細胞，PATU-8988/FU細胞，HCT116/L-OHP細胞，LOVO/ADR細胞，SGC7901/DDP細胞，SGC7901/VCR細胞，L1210/DDP細胞，H446/VP細胞，COC1/DDP細胞，HepG2/ADR細胞等。