ELISA實驗報告

凡購買慧穎生物ELISA試劑盒提供免費代測，如下為實驗原理及操作方法

客戶及指標(biāo)信息

檢測指標(biāo)*：                                              

試劑盒來源*：                                                 

前言

酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本，干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子（或受體）的水平。

材料與方法

1 材料

1.1 主要試劑

ELISA檢測試劑盒

1.2 主要儀器及耗材

酶標(biāo)儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）公司產(chǎn)品

洗板機：芬蘭（Thermo Labsystems）公司產(chǎn)品

離心機：微量高速離心機（國產(chǎn)）

移液器：吉爾森P型移液器(Pipetman)產(chǎn)品

培養(yǎng)箱：隔水式恒溫培養(yǎng)箱（國產(chǎn)）產(chǎn)品

其他所需耗材均為國產(chǎn)。

2 方法

2.1 實驗過程

（1）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)品按照說明書稀釋好五個梯度，各個梯度每孔加樣量都為50Μl；

（2）加樣：分別設(shè)空白孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μL，然后再加待測樣品10μL。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；

（3）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（4）配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用；小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；

（5）加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外；

（6）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（7）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；

（8）顯色：每孔先加入顯色劑A50μL，再加入顯色劑B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min；

（9）終止：每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)；

（10）測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15min以內(nèi)進行。

2.2  計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為綜坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

實驗結(jié)果

見Excel附件

文章來源：上海慧穎生物科技有限公司免疫實驗室