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HHL-5細胞,HHL-5細胞株 相關操作

發布時間:2016-10-17瀏覽:4907次

文章標題:HHL-5細胞,HHL-5細胞株 相關操作

產品名稱:HHL-5細胞

中文名稱:人胚胎肝上皮細胞

培養條件:1640+10% FBS

細胞形態:上皮樣

生長狀態:貼壁生長

 

細胞總數:1~3*106

傳代周期:2-3天

傳代比例:1:2~1:4

換液頻率:2-3天

凍存液:90%FBS+10%DMSO

細胞狀態: 良好

 

對于貼壁細胞,若細胞漂浮:培養瓶不開封,用75%酒精擦拭后平躺置于培養箱內。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,換成新鮮的培養基;如細胞還不貼壁,將細胞離心收集移到新的培養瓶中,原培養瓶加部分新鮮培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。對于懸浮細胞:收到細胞后,將細胞全部離心,去掉舊的培養基,換成新鮮的培養基繼續培養。

特別注意:(如使用公共實驗室或者初次接觸,建議添加雙抗培養)

(1)貼壁細胞收到當天有少量或沒有飄忽的細胞可以當天換液,因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時,請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代,請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養

(2)收到細胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清,(原瓶培養基的繼續使用時間zui長不宜超過72小時)

(3)如簽收時出現培養瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并SUER技術人員

細胞接收后的操作流程與注意事項:

1)貼壁細胞生長緩慢;適當提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據該細胞生長特性生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養瓶繼續培養

2)如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態,請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天;同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡,請及時實驗室技術人員會跟進解決

3)生長不均:貼壁細胞若出現分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養基進行培養

細胞常規培養傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)

(1)吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)

(2)注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

(3)取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的*培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養

(4)鏡下觀察消化情況,在細胞生長特性邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml*培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。

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